Тест-система Фемофлор и ее применение

Фемофлор-это диагностическая тест-система (набор реагентов), предназначенная для исследования состава микробиома женского мочеполового тракта.

Исследования с помощью Фемофлор предназначены в основном для женщин репродуктивного возраста вне беременности при подозрении на наличие урогенитальных инфекций.

Ключевыми моментами для назначения исследования являются:

• для женщин репродуктивного возраста,
• вне беременности,
• подозрение на наличие ИППП (инфекции, передающиеся половым путем).

Однако в некоторых случаях возможно использование системы Фемофлор и в ходе беременности.

Набор реагентов для исследования Фемофлор разработан в РФ совсем недавно. Заявки на патенты были зарегистрированы в Роспатенте в 2008 году.

Тест-система позволяет выявить, например, бактериальный вагиноз. Позволяет количественно определить состав микрофлоры влагалища, патогенные микроорганизмы.

Отметим, что тест-система Фемофлор активно используется за рубежом (более, чем в 46 странах) как наиболее продвинутая в настоящее время. Получены рекомендации CDC, IUSTI, РОАГ.

В качестве основных преимуществ диагностики указываются высокая чувствительность и специфичность. Время получения результата — 3-4 часа после доставки биоматериала в лабораторию.

Фемофлор-что это

Фемофлор-это набор реагентов (то есть тест-система), позволяющий исследовать исходный материал на предмет количества и качества живых микроорганизмов. Другими словами, Фемофлор позволяет выявить патогенные микробы, вызывающие инфекцию, и определить степень дисбаланса микробной флоры.

Сложность задачи связана с тем, что в составе вагинального биотопа (то есть в урогенитальном тракте женщины) насчитывается более тысячи видов микроорганизмов. Имеется в виду нормальная и условно патогенная микрофлора.

Исследование проводится с использованием технологии реал тайм ПЦР или, как еще говорят, используется ПЦР в реальном времени. Некорректно поставленный диагноз неизбежно приводит к неадекватной терапии (неправильный выбор лекарственных препаратов и назначенные дозы). Некачественное лечение увеличивает риск рецидивов, приводящих к переходу инфекционно-воспалительного процесса в хроническую стадию.

Справочно. Целью разработки нового метода диагностики является повышение эффективности уточнения дисбаланса биоты, особенно на ранней стадии возникновения нарушений, до развития осложнений.

Предложенный при создании тест-системы Фемофлор метод (ПЦР в реальном времени) позволяет провести сравнительный анализ конкретных представителей нормо- и условно-патогенной биоты с общим количеством микроорганизмов с целью выявления дисбаланса.

Также определяется степень выраженности дисбаланса и выясняется роль конкретных микроорганизмов в его развитии.

Заявки на изобретение зарегистрированы в Роспатенте:

Биоценоз-что это

Биота — это сложившаяся совокупность видов живых организмов, обитающих в общем пространстве. Синоним биоты — биоценоз.

При рассмотрении вопроса здоровья половой системы женщины основным является устойчивость сложившегося соотношения составляющих биоценоза. То есть мазок на биоценоз и его последующее исследование не должно показать дисбаланс.

Важно. Главным критерием нормы для женщин репродуктивного возраста принято доминирование лактобацилл в урогенитальном тракте.

В связи с пересмотром критерия нормы изменилась и задача для диагностики. Простой поиск возбудителей ИППП в условиях их сильной мутации уже не достаточен.

Теперь требуется комплексная оценка биоценоза. Сюда входят:

• тестирование на патогены,
• определение соотношений нормальной и условно патогенной микрофлоры.

Справочно. Статистика указывает на то, что больше 80-ти процентов заболеваний у женщин, обратившихся к гинекологу являются симптомокомплексами, в основе которых дисбаланс микробиоты. На долю ИППП относятся менее 10%.

Место Фемофлор в диагностике урогенитальных инфекций

Следует понимать, что тест-система Фемофлор не предназначена для замены традиционных методов диагностики инфекций. Есть более дешевые методы, которые по своей чувствительности и специфичности вполне работоспособны.

В список первой линии срининга входят:

• рН-метрия,
• микроскопия,
• бакпосев (культуральный метод).

PH-метрия в гинекологии — это достаточно эффективный метод диагностики. Нормальные значения pH (кислотность микрофлоры) говорят об устойчивости биоценоза. Здоровье женщины в норме.

Норма pH в пределах 4.5 — 7.5. Анализ мазка микрофлоры урогенитального тракта на pH, пожалуй, самый быстрый и простой метод. При обнаружении сдвига кислотности от нормы в щелочную сторону требуется дальнейшее исследование.

Слабость метода в том, что рН метрия может указать на наличие или отсутствие проблемы. Но не в состоянии указать какой микроорганизм явился нарушителем устойчивости биоценоза. Микроскопия — это способ быстрой оценки состава микрофлоры. Привычно и недорого на основе подсчета лейкоцитов в мазке можно определить наличие воспаления.

Однако определить вид микроорганизма, нарушившего биоценоз, не представляется возможным.

Написанная в результатах исследования фраза “доминируют лактоморфотипы” совсем не означает доминирование именно лактобацилл. В сообществе лактоморфотипов сведены микроорганизмы только внешне (при разглядывании в микроскоп) похожие на лактобациллы.

То есть метод микроскопии субъективен и поможет выявить нарушения биоценоза, также, как и рН метрия. Но этого будет недостаточно для постановки точного диагноза и назначения эффективного лечения.

Более точным диагностическим методом представляется бакпосев (культуральный метод). Именно бак посев дает возможность выявить видовую принадлежность микроорганизмов. Плюсом идет возможность определения чувствительности к предполагаемым к использованию антибиотикам.

Однако в отношении вирусов и строгих анаэробов бак посев не работает. Культивировать на питательных средах микроорганизмы, которые могут жить только при отсутствии кислорода (анаэробы) практически невозможно.

Такие распространенные микроорганизмы, как хламидии, микоплазма гениталиум, вирусы, требуют особых условий культивирования. Для них отметка в заключении по бак посеву “роста нет” совсем не означает, что в действительности бактерий нет.

Справочно. Тест-система Фемофлор как раз предназначена для дальнейшего исследования (уточнения видовой принадлежности микроорганизмов) в случае обнаружения проблемы привычными методами.

Особенно интересна тест-система Фемофлор при необходимости выявления некультивируемых микроорганизмов.

Качественная ПЦР и ПЦР в реальном времени

В предыдущем разделе без внимания остался метод ПЦР. Та самая классическая ПЦР.

Справочно. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) является наиболее чувствительной и специфичной методикой. Результат исследования не зависит от субъективных качеств специалиста, поскольку этот метод инструментальный.

Синонимами названия классической методики являются — ПЦР по конечной точке и качественная ПЦР. Технология не культивационная (как бак посев), поэтому жестких требований к сохранности жизнеспособности микроорганизмов до момента доставки в лабораторию нет.

Строгие анаэробные микроорганизмы обрабатываются без сложного оборудования для создания бескислородной среды. Но классическая ПЦР не дает количественной оценки. Результат только в формате “обнаружено/не обнаружено”. Однако имеющихся возможностей разработчику тест-системы Фемофлор было достаточно, чтобы взять ПЦР для основы.

Читайте также по теме

Что такое клостридии, лечение и профилактика заболевания

В результате была разработана технология ПЦР в реальном времени, на которую и были поданы заявки на патенты.

Справочно. Результаты ПЦР в реальном времени позволяют получить ответ на вопрос нарушен или нет баланс микрофлоры, а при дисбалансе — выявить доминирующую группу условно патогенных бактерий.

Составляющие тест-системы Фемофлор

Следует понимать, что использование тест-системы Фемфлор, цена на применение которой колеблется в районе 1500-2500 рублей (скидки бывают) не всегда возможно. Разработчик и не предлагает тотальную замену этой системой традиционные диагностические методы.

Тем не менее во многих случаях реальную помощь при лечении ЗППП может оказать именно Фемофлор. За счет точно выявленных возбудителей заболевания.

В ходе разработки тест-системы Фемофлор было принято решение выделить целевые группы в наборе реагентов.

Справочно. Основными наборами тестов являются Фемофлор 16 и Фемофлор Скрин. В качестве промежуточных — Фемофлор 4 и Фемофлор 8.

У каждого набора свои диагностические цели. Такое разделение также позволило корректировать цену исследования в зависимости от сложности задачи.

Фемофлор 16-что это

Набор реагентов Фемофлор 16 — это расширенный профиль для детальной характеристики микрофлоры. Естественно на исследование с помощью набора Фемофлор 16 цена самая высокая. Обычно около 2500 рублей.

Показаниями для детального анализа микрофлоры с помощью Фемофлор 16 являются:

• хронические рецидивирующие инфекционные процессы,
• прегравидарная подготовка (подготовка супружеской пары к полноценному зачатию, вынашиванию беременности и рождению здорового ребенка),
• подготовка к различным внутриматочным вмешательствам,
• оценка качества лечения.

Фемофлор 16-какие инфекции входят

Полный перечень патогенов в набор Фемофлор 16 не входит. Цифра 16 обозначает примерное количество выполняемых тестов.

Набор реагентов Фемофлор 16 предусматривает возможность анализа следующих показателей и микроорганизмов:

• контроль взятия материала (КВМ),
• общая бактериальная масса (ОБМ),
• Lactobacillus spp. (нормофлора),
• Enterobacteriaceae (аэроб),
• Streptococcus spp. (аэроб),
• Staphylococcus spp. (аэроб),
• Gardnerella vaginalis/Prevotella bivia/Porphyromonas spp. (анаэроб),
• Eubacterium spp. (анаэроб),
• Sneathia spp./Leptotrihia spp./Fusobacterium spp. (анаэроб),
• Megasphaera spp./Veilonella spp./Dialister spp. (анаэроб),
• Lachnobacterium spp./ Clostridium spp. (анаэроб),
• Mobiluncus spp./Corynebacterium spp. (анаэроб),
• Peptostreptococcus spp. (анаэроб),
• Atopobium vaginae (анаэроб),
• Mycoplasma hominis (микоплазмы),
• Ureaplasma (urealyticum + parvum) (микоплазмы),
• Candida spp. (грибы).

Используемое в списке микроорганизмов буквосочетание spp. (сокращение от латинского speciei) говорит о том, что имеется в виду собирательный видовой эпитет. Как пример, название Streptococcus spp. говорит о том, что исследование справедливо для всех элементов (таксонов) вида Streptococcus.

Поскольку перечень возможных патогенов не полный, то по усмотрению врача исследования с помощью набора Фемофлор можно дополнить качественным ПЦР на Trichomonas vaginalis, Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis, вирусы — HSV-1,2, CMV.

Причем дополняющие исследования можно провести на образцах из той же пробирки с биоматериалами, которые предназначались для исследования набором Фемофлор 16.

Фемофлор Скрин-что это

Фемофлор Скрин-это компактный тест, включающий комплекс основных показателей микрофлоры (возбудители ИППП, нормофлора, наиболее распространенные условно патогенные микроорганизмы).

Тест способен анализировать наличие специфической инфекции (микоплазма гениталиум, гонорея, трихомонада, хламидия — абсолютные патогены, которые необходимо лечить в обязательном порядке) и вирусов (герпес-вирус, цитомегаловирус).

Тест Фемофлор Скрин, цена на который достаточно демократична (1100-1700), и может назначаться для верификации диагноза при первичном обращении пациенток с жалобами.

Обратите внимание на то, что цена может отличаться по регионам, а также в зависимости от свободного комплектования набора реагентов. В любом случае следует уточнять в лаюораториях.

Фемофлор 4

В тест-системе Фемофлор 4 исследуются следующие показатели и микроорганизмы:

• контроль взятия материала (КВМ),
• общая бактериальная масса (ОБМ),
• Lactobacillus spp. (нормофлора),
• Gardnerella vaginalis/Prevotella bivia/Porphyromonas spp. (анаэробы),
• Candida spp. (грибы).

Этот тест следует воспринимать, как “укороченный” промежуточный тест для уточнения.

Фемофлор 8

В тест-системе Фемофлор 8 состав показателей и микроорганизмов следующий:

• контроль взятия материала (КВМ),
• общая бактериальная масса (ОБМ),
• Lactobacillus spp. (нормофлора),
• Enterobacteriaceae (аэроб),
• Streptococcus spp. (аэроб),
• Gardnerella vaginalis/Prevotella bivia/Porphyromonas spp. (анаэробы),
• Gardnerella vaginalis/Prevotella bivia/Porphyromonas spp. (анаэробы),
• Eubacterium spp. (анаэроб),
• Mycoplasma hominis (микоплазмы),
• Ureaplasma (urealyticum + parvum) (микоплазмы),
• Candida spp. (грибы).

Тест Фемофлор 8 (и частично Фемофлор 4) может быть применен при клинике вульвовагинального кандидоза, бактериального вагиноза, а также с целью оценки эффективности лечения.

Фемофлор при беременности

Анализ микрофлоры при беременности очень важен. Логически даже не специалисту понятно, что состав микрофлоры, в которой развивается плод, имеет во многом определяющее значение для здоровья новорожденного.

Причем нарушения биоценоза урогенитального тракта при беременности могут быть опасны как для плода, так и для самой женщины. Нарушения могут повлиять даже на характер родоразрешения.

Справочно. Использовать Фемофлор при беременности как рутинную процедуру разработчик метода не рекомендует.

По итогам исследований, проведенных в ФГБОУВО “УГМУ” (г. Екатеринбург), был сделан вывод о том, что у клинически здоровых беременных в отсутствие жалоб и признаков, характерных для патологии влагалища, вагинальная микробиота в основном соответствует критериям нормоценоза.

Отметим, что в первом триместре беременности очень важно доминирование лактобацилл. Исследования в ФГБОУВО “УГМУ” показали, что ведущая роль лактобацил в первом триместре дают возможность обеспечить физиологический биоценоз на протяжении остального срока беременности. Именно по этой причине тест-система Фемофлор при подготовке к беременности может дать прогноз возможных осложнений, а также рекомендации по восстановлению биоценоза.

Хотя Фемофлор при беременности не рекомендовано использовать, все же при появлении жалоб на вагинальный дискомфорт и прочие неприятные проявления возможно исследовать мазок Фемофлор Скрин. Напомним, что Фемофлор Скрин представляет собой урезанную версию тест-системы.

Фемофлор и бесплодие

Идея о том, что наличие возбудителей инфекций, передаваемых половым путем в урогенитальном тракте влияет на возможность зачатия (бесплодие) и повышает риски самопроизвольного выкидыша не нова.

Статистика, накопленная в ходе исследований, проведенных в ФГБНУ «НИИ АГиР им. Д.О. Отта» (г. Санкт-Петербург), показывает, что у женщин, в анамнезе которых имелась невынашиваемость беременности, чаще всего обнаруживалось нарушение микрофлоры влагалища.

В работе, выполненной в ФГБУ НМИЦ АГиП им. В.И. Кулакова (г. Москва), установлено, что дисбиоз влагалища примерно в 2 раза увеличивает риск преждевременных родов.

Справочно. Приведенные данные не являются истиной в последней инстанции по поводу бесплодия и невынашиваемости.

Тем не менее статистика заставляет задуматься. Возможно тест-система Фемофлор позволит повлиять на ситуацию путем уточнения причин дисбаланса микрофлоры с последующей терапией для получения нормоценоза.

Читайте также по теме

Виды анализов на тестостерон

В любом случае тестирование с помощью Фемофлор Скрин позволит улучшить ситуацию.

Фемофлор для мужчин

Думать и рассуждать о том, что тест-система Фемофлор для мужчин подойдет также, как и для женщин неверно.

В названии метода “фемо-” прямо указывает на женское начало. В другой части названия “флор” — имеется в виду среда. Таким образом трактовка названия метода — “исследование женской флоры”.

Тем не менее сам метод исследования (ПЦР в реальном времени) может быть применен и при диагностике мужского биоценоза.

Основная проблема использования Фемофлор для мужчин содержится в основном в алгоритмах трактовки результатов для женщин и мужчин. Врачу будет затруднительно оценить результат обработки мужского биоматериала при тестировании его системой Фемофлор. В тест-системе Фемофлор используется автоматическая трактовка бланка. Таблица в бланке результатов и столбики на гистограмме раскрашиваются в цвета, закрепленные в алгоритме трактовки.

Справочно. Для устранения проблемы была разработана тест-система специально для мужчин — Андрофлор. Использование одной и той же технологии (реал тайм ПЦР) позволяет корректно сопоставить результаты обследования половых партнеров.

Не секрет, что назначение лечения при обнаружении ЗППП, назначается после обследования одного из партнеров. Однако и второму партнеру необходим курс лечения. Так вот при обследовании только одного партнера, второму лечение назначается эмпирически, что иногда не эффективно.

Использование тест-систем Фемофлор и Андрофлор для обследования пар позволяет устранить проблему малой эффективности.

Исследования, проведенные на базе ФГБОУ ВО ИвГМА (г. Иваново), показали, что микробиота половых партнеров может существенно различаться. Факт обмена элементами микрофлоры при незащищенном половом контакте может привести к обострению. Особенно это важно при хронических формах ЗППП, например, при бактериальном вагинозе.

Важно. Индивидуальная диагностика в этом случае позволит скорректировать схему лечения каждого партнера, снизит риск наступления следующего случая рецидива заболевания.

Мазок на Фемофлор

Биоматериал, который требуется для исследования тест-системой Фемофлор, определяет врач, в зависимости от цели диагностики и анамнеза пациентки.

Считается, что соскоб урогенитальный из влагалища наиболее информативен.

Возможно взятие биоматериала и из цервикального канала. Здесь напомним, что их среды в разных экологических нишах и смешивать биоматериал из влагалища и цервикального канала будет ошибкой.

С другой стороны, область взятия биоматериала должна быть наиболее близкой к предполагаемой локализации инфекционно-воспалительного процесса.

Справочно. В настоящее время приобретают актуальность устройства, предназначенные для самостоятельного взятия биоматериала из влагалища в домашних условиях. С последующей доставкой образца на исследование в лабораторию.

Фемофлор 16-расшифровка

Результат исследования тест-системой Фемофлор может быть представлен в виде набора параметров и их значений (обычная таблица) либо в виде таблицы с цветовыми индикаторами и цветной гистаграммой.

Дело в том, что для формирования результата в автоматическом режиме используется так называемый амплификатор детектирующий. Если говорить о конкретной модели, то это ДТ96 или ДТ322.

Конечно, пациентке это ни о чем не говорит. Однако суть в том, что для распечатки результатов в виде таблицы с цветовыми индикаторами требуется специальное программное обеспечение (программа представления результатов).

Естественно не каждая лаборатория может себе купить эту программу. Однако и обычной таблицы достаточно для расшифровки результата.

Фемофлор 16-таблица результатов

На рисунке, взятом из ответов на основные вопросы врачей (от разработчика метода), представлена таблица показателей и гистограмма (правая часть).

Справочно. Таблица и гистограмма — это два варианта представления результатов исследования. Для расшифровки можно использовать один из них.

На рисунке под соответствующими цифрами указаны:

1. Контрольные показатели: КВМ (количество клеток эпителия с микробной пленкой) и ОБМ (общая бактериальная обсемененность),
2. Относительные количества (доля) нормальной микрофлоры (лактобактерии) в ОБМ с показателями выраженный дисбиоз, умеренный дисбиоз, нормоценоз, отмеченными цветом по системе светофор (красный, желтый, зеленый),
3. Относительные количества представителей факультативно-анаэробной микрофлоры (по способу культивирования часто называют аэробами) с цветовым обозначением,
4. Относительные количества (доли) представителей облигатно-анаэробной микрофлоры (строгие анаэробы),
5. Условно-патогенные микоплазмы (интерпретация абсолютных количеств путем сравнения с величиной клинической значимости 104 ЦОЕ/мл),
6. Дрожжевые грибы Candida (абсолютное количество),
7. Качественный формат ответа по патогенному микроорганизму Mycoplasma genetalium: обнаружено/не выявлено,
8. Заключение,
9. Гистограмма: альтернатива таблице.

Фемофлор 16-норма

Состояние нормоценоза характеризуется следующими показателями:

• общая бактериальная масса имеет нормальный уровень, если абсолютный показатель в пределах 10 в 6 степени – 10 в 8 степени),
• нормофлора (Lactobacillus spp) имеет нормальный уровень, если абсолютный показатель больше 10 в 6 степени, а относительный показатель — от 0 до 0,5),
• аэробные и анаэробные условно-патогенные микроорганизмы не превышают нормальный уровень, если абсолютный показатель меньше 10 в 4 степени, а относительный показатель меньше -3), единичные представители УПМ могут иметь слабо увеличенный уровень (относительный показатель от -3 до -2),
• микоплазмы — Mycoplasma hominis и Ureaplasma (urealiticum+parvum) отсутствуют или присутствуют в количествах, не имеющих диагностического значения, если абсолютный показатель меньше 10 в 4 степени),
• грибы рода Candida — отсутствуют или присутствуют в количествах, не имеющих диагностического значения, если абсолютный показатель меньше 10 в 3 степени).

Литература

• Е. В. Рыбина. Современные методы оценки микробиоценоза влагалища. Журнал акушерства и женских болезней, том LXIV, выпуск 1/2015. С. 53-66.
• Ю. С. Шишкова, Т. В. Становая, Л. Н. Бугрова, Е. Д. Графова, Т. А. Пономарева. Молекулярно-биологический анализ содержания лактобактерий во влагалище у женщин репродуктивного возраста. Вестник Челябинского государственного университета. 2013, №7 (298). С. 44-45.
• Инструкция по применению набора реагентов для исследования биоценоза урогенитального тракта у женщин методом ПЦР в режиме реального времени Фемофлор. ООО «ДНК-Технология», 2017.
• А.М. Савичева, Е.Ф. Кира, М.Н. Болдырева, И.С. Галкина. Фемофлор: коротко о главном. Ответы на основные вопросы врачей по диагностике репродуктивно значимых инфекций. Пособие для врачей. ООО «ДНК-Технология». 2020.
• Е. Е. Баранова, Е. И. Батенева, И. С. Галкина, А. Е. Донников, В. В. Зорина, Л. В. Тумбинская, Г. Г. Шигорина. ПЦР в реальном времени: новые возможности технологии в решении репродуктивных проблем. Пособие для врачей. ООО «ДНК-Технология».

Частые вопросы

Каковы основные принципы работы тест-системы Фемофлор?

Тест-система Фемофлор основана на принципе иммуноферментного анализа (ИФА), который позволяет определить наличие и количество определенных антител или антигенов в биологическом материале пациента.

В каких областях медицины применяется тест-система Фемофлор?

Тест-система Фемофлор широко применяется в гинекологии, акушерстве, урологии, а также в области репродуктивного здоровья для диагностики инфекций, связанных с половым путем, и контроля за успешностью лечения.

Полезные советы

СОВЕТ №1

При использовании тест-системы Фемофлор важно строго следовать инструкции производителя, чтобы получить точные и достоверные результаты.

СОВЕТ №2

Перед применением тест-системы Фемофлор необходимо провести калибровку оборудования и проверить срок годности реагентов, чтобы избежать ошибок в результатах.

СОВЕТ №3

При интерпретации результатов тест-системы Фемофлор обратите внимание на возможные факторы, которые могут повлиять на точность анализа, такие как контаминация проб или неправильное хранение реагентов.